Диагностика инфицирования нетипичными микроорганизмами

1.1. Диагностика инфицирования нетипичными микроорганизмами

Относится к Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydia trachomatis и Legionella pneumophila.

Взятие и вид материала

1. Время взятия: в случае серологической диагностики исследуйте два образца сыворотки: в начале болезни (≈1 нед. от появления симптомов) и после ≈2–4 нед. для подтверждения появления антител класса IgM или увеличения титра специфических антител класса IgG. В случае серологической диагностики инфекций, вызванных  Legionella или C. pneumoniae, показано исследование 3-го образца, взятого после очередных 4 нед. (6–8 нед. после появления симптомов).

2. Вид и способ взятия материала табл. 28.1-2.

Таблица 28.1-2. Материал и методы выявления инфекции, вызванной нетипичными микроорганизмами

Микроорганизм

Материал

Методы выявления

L. pneumophilaa

мокрота, промывная жидкость бронхов и бронхиально-альвеолярная, плевральная жидкость, тканевой биоптат, сывороткаб, моча

посев, антитела в сыворотке, антиген L. pneumophila в мочев, реакция прямой иммунофлюорисценцииг, ПЦРд

C. pneumoniae

мазок из носоглотки, промывная жидкость бронхов и бронхо-альвеолярная, сывороткаб

обнаружение антигена методом иммунофлюоресценциие, антитела в сыворотке, ПЦРд, размножение в культуре клетокг

C. trachomatis

выделения из канала шейки матки, мазок (выделения) из уретры, мочаж, выделения из влагалищаж, сывороткаб

как указано выше

M. pneumoniae

мазок из носоглотки, мокрота, промывная жидкость бронхов и бронхо-альвеолярная, сывороткаж

антитела в сыворотке, ПЦРд

a и другие бактерии вида Legionella;

б необходимо поместить 2–5 мл крови в сухую пробирку и сразу же после образования сгустка отцентрифуговать пробирку для получения сыворотки;

в только серогруппа 1;

г метод сложный, редко доступен;

д или другие методы амплификации нуклеиновых кислот;

е или ELISA;

ж только для молекулярной диагностики (напр. ПЦР)

3. Хранение и транспортировка материала

1) мазок с носоглотки

а) мазок для исследования молекулярными методами (напр. ПЦР) — выполните стерильным, влажным тампоном, поместите в стерильную пробирку с небольшим количеством 0,9 % NaCl и немедленно передайте в лабораторию (образец можно хранить при температуре 2–8 °C в течение 24 ч; если необходимо длительное хранение, образец можно заморозить при температуре ≤–20 °C). Не применимо для диагностики Legionella spp. Методом ПЦР M. pneumoniae определяют в образцах от лиц без симптомов болезни.

б) материал для исследования методом иммунофлюоресценции определяющим антиген C. pneumoniae следует нанести на предметное стекло, фиксировать спиртом, высушить и отправить в лабораторию (исследование трудоемкое, возможны недостоверные результаты);

2) сыворотка для серологического исследования — можно хранить в плотно закрытой таре при температуре 2–8 °C в течение ≈3 дней, а при –70 °C в течение нескольких лет;

3) кровь для серологических исследований — как можно быстрее доставьте в лабораторию (ее нельзя замораживать, но можно оставить в течение ≤48 ч при температуре 2–8 °C). Продукты распада эритроцитов вследствие гемолиза могут стать причиной ложноотрицательного результата серологического исследования, а также исследования методом ПЦР.

4) мокрота и бронхиальный лаваж – можно хранить при температуре 2–8 °C в течение 24 ч, предпочтительно заморозить при температуре −70°C;

5) моча — можно хранить ≤24 ч при температуре 2–8 °C или в течение одного года при –70 °C.

Перед направлением материала на исследования для выявления нетипичных микроорганизмов, обратите внимание на общие рекомендации относительно диагностики бактериальных инфекций →разд. 28.1. Материал передавайте при температуре ≈4 °C (образцы для выделения M. pneumoniae при температуре 37 °C). Материалы (за исключением цельной крови) для исследования на предмет L. pneumophila можно пересылать замороженными.

Методы идентификации нетипичных бактерий

Методы обнаружения →табл. 28.1-2. Материалом для исследования методом ПЦР могут быть образцы из верхних дыхательных путей (в случае Legionella spp. только из нижних отделов дыхательных путей), либо кровь. Ниже приведена интерпретация результатов серологических исследований.

1. C. pneumoniae или C. trachomatis: первичное заражение — IgM после ≈3 нед., IgG спустя 6–8 нед.; повторное заражение — IgM (низкий титр), IgG-спустя 1–2 недели (быстрое увеличение титра); хроническая инфекция — как минимум в 2 раза увеличен титр IgA. При острой инфекции  результат считается положительным при 4-кратном повышении титра специфических антител или наличии антител класса IgM. В настоящее время стандартным методом выявления инфицирования C. pneumoniae и C. trachomatis является поиск антигенов бактерий в клиническом материале методом иммунофлюоресценции (или иммуноферментного анализа) с использованием моноклональных антител.

2. M. pneumoniae: у детей и взрослых в возрасте <20 лет в течение первого периода заболевания (7–21 дней) присутствуют специфические антитела класса IgM. У пожилых людей быстрее (7–9 дней) появляются специфические антитела класса IgM и быстрее (7–9 дней) повышаются титры специфических антител класса IgG. Результатом, подтверждающим текущую инфекцию принимают наличие сероконверсии (появление специфических антител и/или их накопление) или титр ≥1:32 в случае реакции связывания комплемента, а в тесте ELISA →см. ниже.

3. Бактерии рода Legionella: за результат, подтверждающий текущую инфекцию, принимают наличие сероконверсии (тест микроагглютинации — увеличение титра антител, когда один титр составляет ≥1:128, ELISA — 2-кратное повышение, при условии, что 1 и более результат положительный) между острым периодом и периодом выздоровления. Одиночный результат является ненадежным. Чаще всего специфические антитела класса IgM появляются через 15–20 дней после инфицирования, а антитела класса IgG — даже через 6–9 нед. Возможно появление перекрестных реакций, в частности, с B. pertussis. Значение серологических методов уменьшилось после введения быстрых тестов, обнаруживающих антиген L. pneumophila серогруппы 1 в моче. Антигены L. pneumophila выводятся с мочой в начале заболевания (до 7–10 дней). Быстрые тесты характеризуются чувствительностью 80 % и специфичностью 99–100 %. В связи с этим принято, что легионеллез (вызванный серогруппой 1) можно исключить, если результаты исследования ≥3 образцов мочи, взятых в разные дни будут отрицательны. Эти тесты обнаруживают только антигены L. pneumophila серогруппы 1, вызывающей большинство внебольничных инфекций.

Партнеры

Используя веб-сайты и мобильные приложения, администратором которых является Практическая Медицина, Вы соглашаетесь использовать файлы cookie, в соответствии с Вашими текущими настройками браузера, а также в соответствии с Политикой Медицины Практической о файлах cookie.