Диагностика вирусных инфекций Взятие и вид материала

-tekst-podpunkt-1-">1. Время взятия: взятие материала следует проводить в остром периоде инфекции, а в случае серологических исследований также после 2–4 нед. (с целью выявления динамики изменений концентрации антител).

2. Вид, способ взятия и транспортировка материала: зависит от клинической формы инфекции и этиологического фактора, а также от используемого диагностического метода →табл. 28.2-1 и ниже.

Таблица 28.2-1. Вид, правила взятия и транспортировки клинического материала для вирусологических исследований

Локализация инфекцииa

Материал, инструкция взятия

Наиболее частый этиологический фактор

Методы исследований

нос, горло

смывы из носа (раствор Хенкса) или мазок из горла (сделайте взятие тампоном на транспортную систему с раствором Хенкса), сыворотка

аденовирусы, энтеровирусы, вирус гриппа и парагриппа, корь

культивирование, IFA, определение антител

нижние дыхательные пути

мазок из горла — как указано выше

вирус гриппа и парагриппа, риновирусы, RSV

как выше

смывы — больной неоднократно полощет горло раствором Хенкса, сыворотка

как выше

COVID-19

аспират из трахеи, бронхоальвеолярный смыв, индуцированная мокрота, мазки из носоглотки, мазки из глотки и носа

SARS­CoV-2

ОТ-ПЦР

кожа, слизистые оболочки

 

пузырьки, эрозии

содержание пузырей (в закрытом капилляре), соскобы (в пробирке), мазок из шейки матки, выделения из влагалища, кал, сыворотка

HSV, VZV, энтеровирусы

препарат из соскобов, полученный методом Tzanck, IFA, культивирование, PCR, определение антител

высыпания другой морфологии

соскоб с экзантем

энтеровирусы, вирус кори, вирус краснухи, аденовирус, парвовирус В19

культивирование, определение антител, PCR

мазок из горла (сделайте взятие на среду Хенкса), кал, моча

сыворотка, кровь

менингит, энцефалит, миелит

мазок из горла (следует сделать взятие тампоном на среду Хенкса)

энтеровирусы

культивирование, PCR, IFA, определение антител в сыворотке и PMR

кал, мазок из ануса (следует сделать взятие тампоном на среду Хенкса)

энтеровирусы

PMR (1–3 мл в сухую, стерильную пробирку)

HSV, VZV, вирус клещевого энцефалита, арбовирусы, аденовирусы, вирус эпидемического паротита, вирус кори, энтеровирусы

сыворотка

энцефалит

биоптат головного мозга — на практике выполняется исследование PMR

арбовирусы, вирус бешенства, герпесвирусы, JC вирус

микроскопическое исследование, PCR, IFA

диарея, рвота

мазок из горла (1–3 мл в сухую стерильную пробирку)

аденовирусы

электронная микроскопия, EIA, ELISA, LAT

кал (набранный в стерильную сухую пробирку), может быть мазок из анусаб (помещен в 2 мл 0,9 % NaCl)

аденовирус 40/41, норовирусы, ротавирусы

гепатит

сыворотка (5–10 мл крови, взятой натощак в сухую стерильную пробирку с антикоагулянтом, не используйте ватные или корковые пробки, пробки из лигнина)

HAV, HBV, HCV и другие

гистологическое исследование и IFA, PCR, RT PCR, гибридизация

биоптат

HBV, HCV и другие

гистологическое исследование и IFA, PCR, RT-PCR, гибридизация

конъюнктивит, кератит

мазок из конъюнктивы (сделайте взятие тампоном на среду Хенкса), соскобы роговицы

аденовирусы, HSV, VZV

IFA

миокардит

перикардиальная жидкость, биоптат сердечной мышцы, кал, сыворотка

Coxsackie B

культивирование, определение антител

геморрагические лихорадки

 

смывы из глотки, бронхиальный секрет, биоптат, сыворотка

вирусы геморрагических лихорадок

культивирование, определение антител, ПЦР

a При некоторых системных инфекциях, сопровождающихся виремией, следует сделать взятие мочи (корь, краснуха, CMV) или цельной крови (корь, CMV) с целью культивирования вируса (корь) или выявление его антигенов в лейкоцитах (напр., CMV). С целью диагностики инфицирования HIV следует отправить сыворотку (EIA или ELISA, Western blot)

б Альтернативно, когда нет возможности произвести забор кала.

CMV — цитомегаловирус, HAV — вирус гепатита A, HBV — вирус гепатита B, HCV — вирус гепатита C, HSV — вирус простого герпеса, IFA — метод иммунофлюоресцентного исследования, LAT — латекс-агглютинация, PCR — метод полимеразной цепной реакции, PMR — спинномозговая жидкость (ликвор), RSV — респираторно-синцитиальный вирус, RT PCR — метод цепной полимеразной реакции с обратной транскрипцией, VZV — вирус ветряной оспы и опоясывающего лишая

Методы идентификации вирусов

1. Электронная микроскопия: позволяет непосредственно выявлять частицы вируса во взятом материале (напр., кал); модификацией метода позволяющей повысить чувствительность является иммуномикроскопия. Доступна лишь в нескольких лабораториях в специализированных центрах. Взятие и транспортировка материала →см. ниже.

2. Культивирование: позволяет увеличить количество и подтвердить присутствие вирусов во взятой пробе (мазки берут в транспортную систему со средой для культивирования клеток [раствор Хенкса] или 0,9 % NaCl, жидкость из пузырьков на коже — в закрытом капилляре, образцы тканей, соскобы — в сухих пробирках. Спинномозговая жидкость, смывы, полученные с использованием раствора Хенкса, кал, цельная кровь с гепарином, моча). Вирус размножают в соответствующих клеточных культурах или в куриных эмбрионах (напр., вирус гриппа), а затем идентифицируют на основе цитопатического эффекта или с использованием специфических антител (выявление антигена) или молекулярными методами. Взятие материала следует осуществлять в чистый, стерильный, плотно закрываемый контейнер без консервантов →табл. 28.2-1. Использование транспортных систем для культивирования бактерий может сделать невозможным выделение вирусов. Образцы тканей следует поместить в небольшом количестве 0,9 % NaCl или раствора Хенкса. Материал следует пересылать в лабораторию при темп. 2–4 °C. Перед культивированием образец можно хранить <12–24 ч при темп. 4 °C. Если доставка материала в лабораторию в течение 24 ч невозможна, в некоторых случаях его можно заморозить и транспортировать в лабораторию в условиях, предотвращающих размораживание (согласуйте такую тактику с персоналом лаборатории).

3. Серологические методы: в клинической практике играют основную роль в вирусологической диагностике. Выявляют вирусные антигены в клиническом образце, а также специфические антитела классов IgM и IgG в сыворотке или повышение их титра (обычно ≥4-кратное) в т. н. парных сыворотках (один образец, взятый в острой фазе болезни, а другой — в период восстановления  после 2–4 недель).

1) выявление антител (EIA, ИФА (ELISA), вестерн-блот, иммунохроматография);

а) сыворотка (1–2 мл) — без гемолиза, следует сделать стерильный взятие в плотно закрытую пробирку; до 48 ч от взятия хранить и перевозить образцы в условиях холода (5±3 °С); если это невозможно см. переслать как можно быстрее при комнатной темп. (21±4 °С). Если образец будет храниться >48 ч  его следует заморозить. Перевозить в условиях, предотвращающих размораживание.

б) цельная кровь (≈5 мл) — следует сделать взятие «на сгусток» в стерильную пробирку; пробу нужно доставить в лабораторию в течение 2 ч от взятия крови;

в) спинномозговая жидкость (≈1 мл) — следует сделать стерильный взятие в плотно закрытую пробирку; правила хранения и транспортировки как в случае сыворотки (см. выше). Определение специфических антител в спинномозговой жидкости всегда нужно проводить параллельно с их определением в сыворотке, взятой в это же время.

2) выявление вирусных антигенов (иммунофлюоресценция [IFA], EIA, ELISA, латекс-агглютинация [LAT]):

а) мазок или смывы из носоглотки (с целью идентификации вирусов дыхательной системы, кори и т. п.) — следует сделать взятие стерильным тампоном, увлажнённым 0,9 % NaCl или раствором Хенкса, а затем поместить тампон в плотно закрытой стерильной пробирке с 1–1,5 мл раствора Хенкса. Кончик тампона не должен быть сухим. Материал следует доставить в лабораторию сразу после взятия. При идентификации вирусов дыхательной системы, материалом для исследования могут быть также приготовленные и переданные в лабораторию препараты для микроскопии, фиксированные ацетоном.

б) цельная кровь — следует набрать 6‑10 мл в стерильную пробирку с антикоагулянтом и немедленно отправить в лабораторию;

в) моча — наберите 10–50 мл в стерильный контейнер и отправьте в лабораторию сразу после взятия;

г) кал →табл. 28.2-1; хранение и транспортировка как при культивации;

д) биоптат ткани — сразу после взятия поместите образец ткани в стерильный стеклянный контейнер, между тампонами, увлажненными 0,9 % NaCl. Доставьте как можно быстрее в лабораторию (<3 ч от взятия), а до момента транспортировки храните в холодильнике (8–12 °С).

4. Молекулярные методы (выявляют геном вируса или его специфические фрагменты): взятие материала следует произвести в стерильные плотно закрытые пробирки или контейнеры. Вид материала: 

1) цельная кровь (≈3 мл) — следует сделать взятие с антикоагулянтом (лучше всего с ЭДТА, не используйте гепарин, который является неспецифическим ингибитором PCR). Если образец доставляется в лабораторию в течение 24 ч, то допустимо транспортировать его при комнатной температуре (21±4 °C), но, если позже (до 5 дней), рекомендуется хранение и транспортировка в холодильнике при темп. (5±3 °С).

2) спинномозговая жидкость (1–2 мл) — после взятия образец следует доставить в лабораторию как можно быстрее, лучше всего — на холоду при темп. (5±3 °С). Если её невозможно доставить в лабораторию в течение 24 ч её следует заморозить и транспортировать в условиях, которые препятствуют размораживанию.

3) сыворотка (2–3 мл) — кровь нужно центрифугировать после взятия как можно быстрее, а сыворотку немедленно отправить в лабораторию (см. спинномозговая жидкость). Если не можете доставить сыворотку сразу после взятия см. действуйте аналогично, как со спинномозговой жидкостью.

4) моча (10–20 мл) — следует сделать взятие из первой струи через 2 ч после последнего мочеиспускания (лучше всего — утром). Образец следует доставить в лабораторию так быстро, насколько это возможно (до нескольких часов можно транспортировать при комнатной темп., если дольше, следует поместить её при темп. 5±3 °С и доставить как можно быстрее).

5) биоптаты тканей (≥0,2 г) — взятие следует выполнить в стерильную пробирку или в контейнер со стерильным 0,9 % NaCl; хранение и транспортировка аналогично моче. При необходимости длительного хранения аналогично спинномозговой жидкости.

6) бронхоальвеолярные смывы (1–2 мл жидкости с БАЛ) — хранение и транспортировка аналогично сыворотке.

Партнеры

Используя веб-сайты и мобильные приложения, администратором которых является Практическая Медицина, Вы соглашаетесь использовать файлы cookie, в соответствии с Вашими текущими настройками браузера, а также в соответствии с Политикой Медицины Практической о файлах cookie.