Pruebas microbiológicas

Obtener un resultado correcto en las pruebas microbiológicas, es decir, realizar la correcta identificación microbiológica del agente o agentes etiológicos responsables de las infecciones del tracto digestivo depende en gran medida de la idoneidad de la técnica de obtención de la muestra, de su protección y de su transporte. Errores cometidos en estas etapas pueden impedir la correcta detección de los microorganismos responsables de la infección y conducir a un tratamiento inadecuado.

Materiales clínicos y métodos para el diagnóstico microbiológico de infecciones del tracto digestivo →tabla III.B.7-1. Es importante recordar el uso creciente de métodos de biología molecular para el diagnóstico microbiológico en laboratorios especializados. Estos métodos se utilizan principalmente para identificar microorganismos de crecimiento lento o difícil, y para verificar el resultado de las pruebas serológicas. Muchos laboratorios utilizan métodos de PCR, incluidos kits comerciales, para la identificación rápida de un número cada vez mayor de patógenos del tracto digestivo. Técnicas como RT-PCR, triplex PCR y multiplex PCR se utilizan generalmente en laboratorios altamente especializados.

Procedimiento para la toma de muestrasArriba

Las normas generales para la toma de muestras comprenden el momento idóneo de la obtención, el número de muestras, el lugar de obtención, y el volumen de la muestra.

Las muestras microbiológicas se deben tomar antes de comenzar la terapia antimicrobiana, ya que puede interferir con la detección del agente etiológico. Si esto no fuera posible, las muestras deben tomarse antes de la siguiente dosis de antibiótico. Se toma una muestra de control a los 3-5 días de finalizar el tratamiento.

Las muestras microbiológicas deben tomarse del lugar del proceso inflamatorio en la fase aguda de la enfermedad. Todas las muestras deben ser tratadas como material infeccioso, siguiendo los principios de seguridad establecidos. El material debe enviarse al laboratorio en un contenedor cuidadosamente protegido y etiquetado con una descripción que contenga el nombre y apellidos del paciente, fecha y hora de la obtención de la muestra, y el tipo de material.

Heces para pruebas bacteriológicas o micológicas

Antes de tomar la muestra hay que desinfectarse las manos y usar guantes. Se obtiene una muestra de heces frescas del tamaño de una avellana o 2-3 ml de heces líquidas y se depositan en un contenedor limpio y seco, preferiblemente estéril, usando una espátula unida a su tapa.

Se pueden usar muestras de heces frescas para cultivo microbiológico directo, pruebas de diagnóstico rápido (métodos inmunoenzimáticos), métodos moleculares (p. ej. PCR).

Para la detección de antígenos de H. pylori y toxinas de C. difficile, se consigue un mayor rendimiento diagnóstico con muestra de heces frescas de menos de 2 h de duración. Si la muestra de heces no puede ser procesada inmediatamente, se puede conservar a 4 °C (refrigerador) hasta el día siguiente.

Frotis anal para cultivo bacteriológico

Se realiza si no se puede obtener una muestra de heces. Las excepciones son los casos con sospecha de disentería (Shigella, cepas de E. coli enteroinvasiva ECEI) o similares a la disentería (Campylobacter). En estos casos el frotis anal tiene valor diagnóstico porque estos microorganismos presentan su capacidad de invasión en el intestino grueso.

Si se sospecha infección por C. difficile, el frotis anal es insuficiente para detectar las toxinas.

1. Toma de material

Antes de obtener las muestras hay que desinfectarse las manos y usar guantes médicos. El extremo de un hisopo estéril debe introducirse a través del esfínter rectal externo (2-4 cm) y girarse repetidamente para obtener la muestra, que a continuación se deposita en el medio de transporte y se cierra el contenedor herméticamente. En caso de diarrea aguda, las muestras deben tomarse dentro de los tres primeros días de la enfermedad. En caso de recaída, las muestras deben tomarse durante los períodos de exacerbaciones de los síntomas. La toma precoz de muestras es particularmente importante en caso de sospecha de Campylobacter, E. coli enterohemorrágica (ECEH) u otras cepas de E. coli que produzcan la toxina Shiga (verotoxina), o bacilos de Shigella, ya que el número de bacilos disminuye rápidamente con el paso de los días.

En Polonia, en caso de sospecha de enfermedades causadas por microorganismos de alarma (como la fiebre tifoidea, fiebre paratifoidea, disentería, yersiniosis, cólera, campilobacteriosis y la salmonelosis), es necesario que el director del laboratorio registre el agente etiológico detectado y lo comunique a la Estación Sanitaria y Epidemiológica del Distrito.

2. Almacenamiento y transporte de la muestra

Las muestras de heces o el frotis anal deben enviarse inmediatamente al laboratorio de microbiología. Si la muestra no puede ser entregada en menos de 2 h, debe colocarse en un medio de transporte y almacenarse a 4 °C (refrigerador) como máx. 72 h. Cuando hay sospecha de cólera se utiliza agua peptonada alcalina para transportar la muestra. Las muestras deben transportarse a temperatura ambiente.

Durante el almacenamiento y el transporte, las muestras deben protegerse contra daños y fluctuaciones de temperatura, garantizando la seguridad de la persona que transporta el material biológico.

Heces para estudios parasitológicos

1. Toma de muestras

Las muestras para la prueba de parásitos deben tomarse de diferentes partes y depositarlas en un recipiente de plástico limpio y seco con la tapa bien ajustada. Se deben obtener 3 muestras del tamaño de una nuez o 1-2 ml de heces líquidas a intervalos de 3-4 días, ya que pueden aparecer periódicamente huevos, quistes o larvas de parásitos. Si se obtienen las muestras después de usar laxantes, se deben usar varios contenedores numerados. Si se sospecha amebiasis o giardiasis se deben examinar hasta 6 muestras tomadas en días consecutivos y depositadas en un fijador apropiado indicado por el laboratorio.

2. Almacenamiento y transporte de la muestra

Las muestras de heces deben entregarse preferentemente en menos de 2 h para evitar la alteración de la muestra que puede alterar irreversiblemente la morfología de los parásitos y dificultar su identificación. En algunos casos, las muestras deben transferirse a un recipiente con líquido conservante o a un medio de transporte adecuado y almacenarse a 4 °C (refrigerador). Muchos medicamentos (especialmente compuestos de bario, bismuto, magnesio, aceite de ricino y antibióticos) pueden dificultar la identificación del parásito, por lo que es importante indicar los medicamentos que está tomando el paciente. Las muestras de heces no deben congelarse y descongelarse.

Heces para estudios virológicos

Las heces frescas (un terrón o 1 ml de heces líquidas) para el estudio virológico deben tomarse durante los síntomas clínicos agudos en un recipiente estéril y herméticamente cerrado sin conservantes. El material, hasta el momento de su estudio, debe ser almacenado en refrigerador a 4 °C y transportado a 2-4 °C. Si no es posible entregar la muestra de heces para el estudio de adenovirus, rotavirus y norovirus dentro de las 6 h siguientes a la toma de la muestra, se debe congelar a –20 °C. La sangre entera para la prueba de hepatitis y de CMV debe ser entregada respectivamente en las 3 y 6 h de la toma. La sangre entera se transporta a 2-25 °C. El suero se almacena a 8 °C por un máx. 24 h (después de este tiempo, la muestra requiere congelación a –20 °C).

Líquido de la cavidad peritoneal

1. Toma de material

Tomar una muestra de ascitis de 10-15 ml con una jeringa y depositar en un recipiente estéril con tapa de rosca. Si se sospecha una infección bacteriana anaeróbica, inyectar 5-10 ml de la muestra en medio de transporte anaeróbico (frascos de hemocultivo). Las muestras no deben tomarse con hisopos secos. Muestras de <1 ml no son suficientes para el estudio etiológico.

Para el estudio de infecciones micóticas deben recogerse 5-10 ml en un recipiente estéril con tapa de rosca y enviarse inmediatamente al laboratorio. Muestras de <1 ml no son suficientes para el estudio etiológico.

2. Almacenamiento y transporte

Almacenar el líquido para el diagnóstico de infecciones bacterianas a 37 °C (incubadora), y transportar al laboratorio a temperatura ambiente en 15 min. En caso de infecciones micóticas puede almacenarse a 4 °C (en refrigerador) o congelarse.

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