Citogenética clásica

El bandeo G con tripsina y Giemsa (GTG). Las bandas GTG se obtienen como resultado de la digestión de los cromosomas metafásicos con tripsina y su tinción con una solución amortiguadora de Giemsa. Se trata de un estudio citogenético de diagnóstico básico que permite obtener una imagen completa de las aberraciones cromosómicas en las células (→fig. VI.C.8-1). Con esta prueba, se pueden detectar tanto aberraciones esperadas, consistentes con el diagnóstico clínico y hematológico inicial, como aberraciones inesperadas que pueden cambiar el diagnóstico.
 El estudio incluye solo células proliferantes en la etapa de metafase, y revela aberraciones cromosómicas numéricas y aberraciones estructurales que incluyen a más de 1 mill. de pares de bases (1Mpb). Permite también determinar el porcentaje de células con estas aberraciones en el conjunto general de las células proliferantes. En las neoplasias del sistema hematopoyético son importantes las aberraciones clonales que representan el clon celular neoplásico. Los criterios mínimos de diagnóstico de aberración clonal son: la presencia de un cromosoma adicional de un par dado o de la misma aberración estructural en ≥2 células analizadas o la ausencia de un cromosoma en ≥3 células. Las aberraciones detectadas pueden ser cambios primarios o secundarios. Las aberraciones primarias son los cambios responsables de la enfermedad, los cuales determinan su biología y su curso clínico. Son específicas o características de neoplasias particulares, por lo que su presencia a menudo determina el diagnóstico de una neoplasia particular (→tabla VI.C.8-1). Las aberraciones secundarias surgen como resultado de la evolución clonal del cariotipo en el curso de la enfermedad. Pueden ya estar presentes en el momento del diagnóstico y ser indicativas de una enfermedad avanzada. A veces están inducidas ​​por el tratamiento citostático. Por lo general, no tienen importancia diagnóstica y su importancia pronóstica es menor que la de las aberraciones primarias. Las aberraciones cromosómicas pueden ser no balanceadas o balanceadas, o sea, pueden causar o no cambios cuantitativos en el material genético. Las aberraciones no balanceadas son ganancias o pérdidas de cromosomas enteros (aberraciones numéricas) o de diferentes regiones cromosómicas (aberraciones no balanceadas estructurales). Las regiones que se encuentran en las células neoplásicas en más copias que el número de copias normal, contienen protooncogenes u otros genes que estimulan el crecimiento neoplásico. Las regiones que aparecen en menos copias contienen genes supresores, cuya pérdida favorece el desarrollo de la neoplasia. La importancia biológica de las aberraciones balanceadas depende de las fusiones de genes resultantes u otros reordenamientos genéticos. Las fusiones de genes surgen como consecuencia del intercambio mutuo de fragmentos entre genes localizados en diferentes regiones cromosómicas. Uno de los genes suele ser un protooncogén u otro gen importante en el proceso de la carcinogénesis (→cap. X.A), cuya función se ve alterada como consecuencia de dicha fusión. Un ejemplo lo constituye el gen de fusión BCR-ABL1 en la leucemia mieloide crónica (LMC, →cap. VI.F.2), que aparece a consecuencia de la translocación t(9;22), y que resulta en la formación del cromosoma Filadelfia (Ph; →fig. VI.C.8-1). Es probable que el gen de fusión ABL1-BCR tenga mucha menos importancia. El aumento de la actividad de los protooncogenes también puede ser resultado de su desplazamiento, p. ej. debido a la translocación cromosómica en las proximidades de genes muy activos; p. ej. los genes de cadenas pesadas de inmunoglobulinas (IGH). Un ejemplo es la activación del protooncogén MYC en el linfoma de Burkitt y otros linfomas como resultado de la translocación t(8;14), que traslada este gen hacia las secuencias reguladoras del gen IGH.

El cariotipo de las células neoplásicas puede ser normal o anormal, simple (con la presencia de 1 o 2 aberraciones clonales) o complejo (con ≥3 aberraciones clonales independientes).

Una condición indispensable para el éxito de un análisis citogenético es la entrega rápida al laboratorio (≤24 h) de la muestra correspondiente (médula ósea, en linfomas: ganglio linfático, en leucemia linfocítica crónica: sangre), extraída en condiciones estériles y en cantidad suficiente (médula ósea ≥2 cm3, sangre ≥5 cm3). Se analizan rutinariamente 20-30 células, lo que permite determinar el porcentaje de células con aberración. Para que el resultado de la prueba sea fiable desde el punto de vista diagnóstico, y para que pueda constituir un punto de referencia para los resultados de las pruebas que se realizan durante el tratamiento, la muestra debe tomarse del enfermo antes del inicio del tratamiento. La razón es que cualquier tipo de tratamiento citostático, incluso a corto plazo, y la terapia hormonal (p. ej. con glucocorticoides) pueden cambiar por completo la imagen citogenética.