Reacción en cadena de la polimerasa

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, polymerase chain reaction) es un método cualitativo, dirigido estrictamente a la evaluación de mutaciones genéticas conocidas. Consiste en la reproducción selectiva (amplificación) in vitro de un fragmento de ADN específico para los cebadores oligonucleotídicos utilizados en la reacción. Estos cebadores son complementarios a las hebras opuestas de la misma molécula de ADN, y la distancia entre ellos determina el tamaño de la sección amplificada. Por lo general, oscila entre varios miles de pares de nucleótidos. El análisis de los polimorfismos de loci minisatélites o microsatélites, que son rasgos propios de cada organismo (VNTR [variable number tandem repeats] — número variable de repeticiones en tándem, STR [short tandem repeats] — repeticiones en tándem cortas; son secuencias de ADN repetidas varias o varias decenas de veces, compuestas por 2-4 [STR] o un mayor número de nucleótidos [VNTR], que confieren una variabilidad interindividual por la presencia de alelos con diferente número de repeticiones), o el análisis de los polimorfismos de un solo nucleótido (SNP [single nucleotide polymorphism] — variantes genéticas en la secuencia del ADN que afectan a un solo nucleótido, presentes en la población) permite, p. ej., evaluar el quimerismo postrasplante (después del alo-HCT →cap. VI.L). En las neoplasias derivadas de la línea linfoide, la PCR (a veces complementada con la secuenciación de ADN) se utiliza asimismo para identificar los reordenamientos individuales, específicos de cada enfermo, de genes de inmunoglobulinas y del TCR (T-cell receptor), presentes en el clon de células neoplásicas.

RT-PCR (reverse transcription PCR) es una versión de la PCR que se aplica en oncohematología de forma rutinaria, y que se utiliza para estudiar la expresión de los genes a partir de la evaluación de su ARN mensajero específico (ARNm, transcripción). En el análisis de las neoplasias del sistema hematopoyético, se utiliza en particular para detectar la presencia de fusiones y otros reordenamientos genéticos (→fig. VI.C.8-2). Es un método cualitativo y sensible que da un resultado positivo incluso en presencia de 1 célula defectuosa entre un millón de células normales.

RQ-PCR (real-time-quantitative PCR) es un método cuantitativo que sirve para medir la cantidad de transcripción específica de la neoplasia (p. ej. del gen de fusión BCR-ABL1) a la hora de diagnosticar la enfermedad y monitorizar sus cambios en el curso del tratamiento. Junto con la citogenética clásica, la RQ-PCR constituye un método de referencia para el control del tratamiento, p. ej. en la LMC (→cap. VI.F.2).